1.背景熒光

芯片材料的背景熒光是影響芯片檢測(cè)限的重要因素，而聚合物材料成分復(fù)雜，所以在挑選加工芯片的聚合物材料時(shí)應(yīng)首先考察其背景熒光特性．國(guó)內(nèi)某科研組通過對(duì)Pyrex 玻璃，石英玻璃，鈉鈣玻璃，PDMS，COP以及PMMA等諸多芯片加工材料的測(cè)試，我們發(fā)現(xiàn)，PMMA具有與石英玻璃、Pyrex玻璃相當(dāng)?shù)牡陀谄渌牧系谋尘盁晒?，同時(shí)與PDMS相比具有更短的光漂白時(shí)間和更穩(wěn)定的背景熒光波動(dòng)．這些優(yōu)良的特性表明，我們的芯片所采用的PMMA材料比傳統(tǒng)的芯片材料更適于高性能熒光標(biāo)記的DNA分型檢測(cè)。同時(shí)，我們還發(fā)現(xiàn)，不同廠商生產(chǎn)的PMMA 材料的背景熒光特性存在差異，所以在選擇PMMA芯片加工之前需要仔細(xì)選取低背景熒光的材料。

2.檢測(cè)限

國(guó)內(nèi)某科研組使用40 pmol/L Cy5-dCTP和200pmol/L Cy3-dCTP 的混合水溶液測(cè)定Cy5和JOE通道的檢測(cè)限，得到Cy5-dCTP 和 Cy3-dCTP的信噪比分別為30和21。若以信噪比大于3作為有效信號(hào)的判斷標(biāo)準(zhǔn)，則Cy5-dCTP和Cy3-dCTP的實(shí)際檢測(cè)限可分別低至 4 pmol/L 和 30 pmol/L。使用同一檢測(cè)系統(tǒng)在 PDMS 和石英片貼合芯片上分析相同的 40 pmol/L Cy5-dCTP 時(shí)信噪比為 7，可以看出 PMMA 材料制作的芯片具有更高的檢測(cè)限。

3.重現(xiàn)性

國(guó)內(nèi)某科研組分別計(jì)算溶于水和0.5伊TBE緩沖液的 Cy5-dCTP 和 Cy3-dCTP 連續(xù)進(jìn)樣后遷移時(shí)間和峰高的標(biāo)準(zhǔn)偏差，用以表征PMMA芯片的重現(xiàn)性。溶于水的樣品具有明顯的場(chǎng)放大效應(yīng)，峰高隨進(jìn)樣次數(shù)的增加明顯降低。而溶于緩沖液的樣品表現(xiàn)出更 好的峰高重現(xiàn)性。當(dāng)將Cy3通道的Cy3-dCTP 信號(hào)作為內(nèi)標(biāo)歸一化Cy5通道的Cy5-dCTP 信號(hào)后，溶于水和緩沖液的樣品均獲得了良好的峰高和遷移時(shí)間重現(xiàn)性。此結(jié)果表明在PMMA 芯片上可以通過不同熒光標(biāo)記的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物，歸一化實(shí)際樣品并得到精確的基因分型結(jié)果。

汶顥微流控技術(shù)股份有限公司提供PMMA芯片的加工、量產(chǎn)服務(wù)，提供微流控芯片實(shí)驗(yàn)室組建及技術(shù)培訓(xùn)等相關(guān)服務(wù)。