PCR概念

聚合酶鏈反應(基因擴增)：基本原理 類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR是模擬體內DNA復制過程，在體外特異性擴增DNA片段的一種技術。

PCR的應用領域

1、遺傳病和某些疑難病的診斷

2、病原體的檢測。某些惡性疾病一般用微生物學、生化和免疫 學技術無法查出病原體時，可用PCR來檢查。

3、法醫(yī)和刑偵鑒定。

4、癌基因的檢查。

5、基因探針的制備。

6、基因組測序、染色體巡視。

7、cDNA庫的構建。

8、基因突變的分析和定位誘變。

9、DNA重組。

10、基因的分享和克隆。

標準的PCR過程分為三步

DNA變性

（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA

退火

（60℃-65℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈。

延伸

（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP為原料，從引物的3′端開始以從5′→3′端的方向延伸，合成與模板互補的DNA鏈。

PCR儀的分類

根據DNA擴增的目的和檢測的標準可以將PCR儀分為普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR，實時熒光定量PCR儀等幾類。

普通PCR儀

一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡單的，對目的基因退火溫度的擴增。

原位PCR儀

用于從細胞內靶DNA的定位分析的細胞內基因擴增儀。如病原基因在細胞的位置或目的基因在細胞內的作用位置等?？杀３旨毎蚪M織的完整性，使PCR反應體系滲透到組織和細胞中，在細胞的靶DNA所在的位置進行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA，還能標出靶序列在細胞內的位置。于分子和細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床過程及病理的轉變有著重大的實用價值。

實時熒光定量PCR儀

在普通PCR儀基礎上增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng)，就成了熒光定量PCR。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同，只是在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記，使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng)，得出量化的實時結果輸出。

熒光定量PCR儀有單通道，雙通道和多通道之分。當只用一種熒光探針標記的時候，選用單通道；有多種熒光標記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產物，因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量，需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。

進口品牌

美國ABI、美國Labnet萊伯特、美國Bio-rad伯樂、英國Genetech、英國Techne、德國Eppendorf艾本德、新加坡Esco藝思高、日本TaKaRa、日本ASTEC、澳大利亞Corbett柯柏特、德國Jena耶拿、德國biometra、德國BOECO、英國CLEAVER科麗沃、瑞士ROCHE羅氏、英國Quanta、德國PEQLAB、荷蘭Creacon、美國Cepheid、美國Thermo熱電。

目前進口品牌中美國ABI，美國labnet，美國Bio-rad，日本TaKaRa，英國Techne，德國Eppendorf六大品牌占有率比較高。

根據近年來銷量分析，其中美國ABI除了9700型普通PCR基因擴增儀和2720型基因擴增儀外，新推出的高精確性的Veriti梯度PCR儀，也是所有進口品牌梯度PCR儀中最受客戶認可的一款，是近兩年來銷量較高一款PCR儀；

其次是美國Bio-rad；

日本TaKaRa和美國Labnet梯度PCR儀，價格相對進口品牌中比較便宜，質量和性能也比較穩(wěn)定，從而深廣大客戶的認可，他們的銷售成交價在45000-50000左右，而其它同性能價格的儀器價格在，60000-80000元，所以近年來市場的占有率呈上升的趨勢；

德國Eppendorf和美國Bio-rad是以直銷的模式銷售，因其壟斷直銷方式，外面的經銷商或者當地的經銷商無法進去競爭，所以相同性能的產品價格相對其他品牌要高很多，成交價格一般在7-9萬元左右，市場占有率相對有所下降；

英 國Techne在國內生產，價格相對進口品牌中要低很多，銷量有所上升，市場占有率也上升，價格在35000-40000元左右。

來 源： 醫(yī)療維修幫、計量與質控；Ths to @王寧.

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