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微流控熱循環(huán)擴增技術簡述

KaryMullis發(fā)明的PCR技術包括變性(95℃)、退火(55~70℃)和延展(72℃)三步反應,通常PCR過程中不少于40℃,通過一次循環(huán),DNA分子的數量就增加一倍。Kopp等將PCR技術成功地應用于微流控芯片,為微流控制技術開辟了一個全新的診斷領域,實現了實時PCR、數字PCR等技術。以PCR技術為基礎的微流控芯片主要是在時域、空域上進行加熱或冷卻,也可分為室內固定PCR和連續(xù)流動PCR。瞬時域PCR微流動控制芯片,是一種在微流控芯片內對反應室進行刻蝕,通過反應室內溫度的變化實現熱循環(huán)放大。與FAM探針或染料相結合,單用一個熒光通道就能檢測多個qPCR。

持續(xù)流式PCR系統(tǒng),即空間域PCR微流控芯片,是在芯片所在的環(huán)境中設置三個恒溫區(qū)域,流體流經不同溫度區(qū)時,體驗不同溫度從而實現熱循環(huán),在微流體控制芯片裝置上,通過改變混合液的流速來調節(jié)其持續(xù)時間,它是通過流變、退火、延伸等過程實現PCR擴增。持續(xù)流式PCR微流控芯片中最常用的是帶有蛇形通道的微流控芯片,在泵的作用下,在不同溫度范圍內實現對目標基因的擴增;建立連續(xù)流式PCR微流控芯片,在流體流經管道時環(huán)繞加熱器進行旋轉加熱;隨著系統(tǒng)中壓力的改變,液體塞子在一定溫度范圍內運動。利用鐵磁流體塞作為閥門和執(zhí)行機構,構造了帶鐵磁塞的連續(xù)流PCR微流體芯片,通過磁鐵對其位置進行控制,使微流體流經固定溫度區(qū),從而進行PCR反應,防止樣品的蒸發(fā)。

Matsuda等通過一個旋轉儀器,將液滴在反應管內轉動,使液滴在管內運動。連續(xù)流PCR芯片周期比時域PCR芯片具有更低的功耗和更快的響應速度,但其延展時間和變性時間依賴于系統(tǒng)設計,缺乏靈活性。另外,在連續(xù)流PCR芯片中,往往很難實現實時檢測,而沒有小尺寸的驅動流體流動所需的元件,就會導致整個操作系統(tǒng)過于龐大而無法攜帶(SUNetal.,2007)。所以,盡管基于PCR技術的微流控芯片有很大的優(yōu)越性,它能大大簡化操作步驟,提高效率,縮短檢測時間,減少試劑消耗,能迅速傳熱,可移植性好,但需要熱循環(huán),對加熱裝置等儀器設備有較高要求。



標簽:   微流控
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