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Nat Protoc:開發(fā)出區(qū)分性免疫捕獲芯片定量檢測白細(xì)胞

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在一項新的研究中,來自美國伊利諾伊大學(xué)厄巴納-香檳分校的研究人員開發(fā)出一種高度靈敏度的基于區(qū)分性免疫捕獲(differential immuno-capture)技術(shù)的生物傳感器,它能夠檢測白細(xì)胞亞群。作為一種一次性使用的小型生物芯片的一部分,這種微流體生物傳感器能夠在現(xiàn)場快速地和準(zhǔn)確地對CD4+/CD8+ T細(xì)胞進行計數(shù),以便用于HIV/AIDS診斷。相關(guān)研究結(jié)果于2016年3月10日在線發(fā)表在Nature Protocols期刊上,論文標(biāo)題為“Microfluidic differential immunocapture biochip for specific leukocyte counting”。

這項研究是對研究人員早前發(fā)表在Science Translational Medicine期刊上的一項研究(論文標(biāo)題為“Microfluidic CD4+ and CD8+ T Lymphocyte Counters for Point-of-Care HIV Diagnostics Using Whole Blood”,04 Dec 2013, doi: 10.1126/scitranslmed.3006870)的后續(xù)研究。

論文通信作者、伊利諾伊大學(xué)厄巴納-香檳分校生物工程系主任Rashid Bashir教授解釋道,“全世界有3400萬人感染上HIV/AIDS,而且很多感染病例發(fā)生于缺乏檢測能力的地方。”

Bashir說,“HIV/AIDS的一個重要的診斷性生物標(biāo)記物就是全血中的CD4+和CD8+ T細(xì)胞的絕對數(shù)量。當(dāng)前的診斷工具---流式細(xì)胞儀---比較昂貴,需要大量的血液和經(jīng)過專業(yè)訓(xùn)練的技術(shù)人員來操作。我們開發(fā)出一種基于區(qū)分性免疫捕獲電學(xué)細(xì)胞計數(shù)(differential immuno-capture electrical cell counting)技術(shù)的微流體生物傳感器,它僅需10微升血液就可在20分鐘內(nèi)對特異性的細(xì)胞進行計數(shù)。”(一滴血大約為50微升。)

在人血液中,45%是細(xì)胞。在每微升血液中,紅細(xì)胞大約有500萬個,而白細(xì)胞僅僅有7000個左右。諸如CD4+ T細(xì)胞之類的特異性白細(xì)胞在每微升血液中大約有50~1000個細(xì)胞。電學(xué)細(xì)胞技術(shù)能夠基于細(xì)胞尺寸大小和依賴于測量信號頻率的細(xì)胞膜性質(zhì)來區(qū)分細(xì)胞。然而,區(qū)分相同形狀的細(xì)胞是一大挑戰(zhàn)。

論文第一作者、Bashir團隊博士后研究員Umer Hassan說,“比如,CD4+ T細(xì)胞和CD4- T細(xì)胞不能僅僅根據(jù)電學(xué)測量加以區(qū)分?!?/span>

Hassan補充道,“為了應(yīng)對這項挑戰(zhàn),我們已開發(fā)出一種選擇性地剔除靶白細(xì)胞的技術(shù)。我們的生物芯片接受全血注入,而不需要在芯片外進行樣品制備,這也有效地降低檢測時間?!?/span>

除了含有這種微流體“捕獲腔室(capture chamber)”之外,這種新的芯片將裂解試劑和淬滅緩沖液(quenching buffer)各自的入口整合在一起,這樣就可利用微制造電極對保存的白細(xì)胞進行計數(shù)。諸如CD4+ T細(xì)胞之類的特異性白細(xì)胞可通過與腔室中的抗體相互作用而被捕獲;第二個細(xì)胞計數(shù)器對殘留的白細(xì)胞重新計數(shù)。這兩種細(xì)胞計數(shù)值之間的差值就可給出被捕獲的細(xì)胞濃度。

在臨床試驗中,這種區(qū)分性免疫捕獲生物芯片與細(xì)胞計數(shù)儀在對HIV感染血液樣品中的CD4+ T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞進行計數(shù)時的相關(guān)性達(dá)到90%以上。這種生物芯片也可經(jīng)過改造而能夠?qū)χT如體細(xì)胞或來自組織或液體活組織的細(xì)胞之類的特定細(xì)胞類型進行計數(shù)。

這種新的生物傳感器有潛力成為一種自動化的便攜式血細(xì)胞計數(shù)儀以便有可能在全世界資源有限的區(qū)域進行POCT檢測。Bashir團隊正在將這種儀器小型化,以便使得它成為一種手持式設(shè)備,而且他們同時也在設(shè)計一種能夠大規(guī)模產(chǎn)生的盒體(cartridge)。


標(biāo)簽:   微流體 生物芯片 芯片
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